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结构生物学技术效劳
结构生物学技术效劳

重组卵白表达&纯化

重组卵白是应用了重组DNA或重组RNA的技术从而获得的卵白质。重组卵白包括种种受体、细胞因子、生长因子、转录因子、免疫检查点、激素、酶、病毒抗原、抗体片段、Prodots等,可用于卵白结构研究、新药发明、生物药生产、免疫检测试剂开发、抗体制备、体外酶活测定等商业领域以及ELISA、免疫实验、细胞实验等科学研究。


cq9电子拥有先进成熟的卵白表达技术与卵白纯化体系,可针对客户差别需求完成多种类卵白的生产,为您提供高纯度、高质量、具有cq9电子生物活性的卵白产品。

效劳规模
  • 可溶卵白
    在细胞质、细胞周质中,以小分子状态溶于水或其他溶剂的卵白。
    cq9电子生物团队拥有成熟富厚的可溶卵白表达纯化经验,为您提供定制化的一站式卵白表达纯化效劳。
  • 膜卵白
    生物膜所含卵白,包括糖卵白,载体卵白和酶等。是科学研究的热点,也是药物研发的理想靶点。重组膜卵白过表达的方法可快速足量为您提供研究所需样品。
  • 排泄卵白
    外源基因在细胞内表达,再将卵白质排泄到细胞外。包括血液和胞外基质中的细胞因子、补体、降解酶类、肽类激素、免疫球卵白等。
  • 容纳体
    外源基因在原核细胞中表达时,形成的由膜包裹的高密度不溶性卵白质颗粒。容纳体内的卵白呈非折叠状态聚集,不具有生物学活性。
效劳流程
1. 质粒构建
凭据您给定的卵白对应的基因编码序列,我们将合成适于卵白表达的基因片段。在基因载体的选择和纯化标签的添加上,我们会广泛地查阅文献纪录以及听取您的特殊需求,最终凭据技术团队的经验,提出最合适的计划。
目前可用的纯化标签、载体包括但不限于以下

纯化标签 载体
His-GST-precission His-CL7-precission His-GFP-precission pET28a pFastbac
His-GST-TEV His-MBP-precission GP67-His-sumostar-TEV pET22b pFastbacDuet
His-TEV His-sumo-precission FLAG-avi pGEX-6p-1 pColdTF
His-precission His-TEV-EGFP-precission mcherry-TEV pETDuet-1 pVB322
His-Trx-precission His-protein A pACYCDuet-1 ...
His-Dsba-precission thrombin-Fc pCDFDuet-1
His-strep tag II -precission His-precission-strep-TEV pcDNA3.1
2. 表达系统
原核表达系统
通常使用大肠杆菌,如 BL21, Rosetta,其他可用细菌宿主包括枯草芽孢杆菌,链霉菌。
我们拥有多种表达载体与最佳菌株相容库,不绝优化表达条件与复性,力求获得最高产量参数组合
适用于 无糖基化、经过简单修饰的重组卵白、同位素标记卵白
优点
? 手段成熟、应用广泛、本钱低
? 滋生快,表达量高、缩短实验时间
? 抗污染能力强
? 表达产品疏散纯化相对简单、稳定性好
? 遗传配景清晰
酵母表达系统
分为酿酒酵母表达系统和甲醇营养性酵母表达系统,后者(如毕赤酵母 Pichia)是目前应用最广泛的酵母表达系统。
我们利用特有的载体宿主组合,可大大提高重组卵白表达质量与数量,缩短实验周期。
适用于 排泄卵白、经过简单修饰的重组卵白、同位素标记卵白等
优点
? 周期短、本钱低、效率高
? 具备了广泛性的对卵白的加工、翻译后修饰能力
? 可用来表达排泄卵白
? 无内毒素
昆虫表达系统
又称昆虫杆状病毒系统(baculovirus expression vector system, BEVS),最接近哺乳动物细胞的表达系统。
我们的多系统、多载体的表达战略可以克服古板表达系统中的种种难点,最洪流平提高表达效率和表达质量。
适用于 病毒疫苗、信号分子、细胞因子、激酶等
优点
? 基因容量大,外源基因表达效率高
? 糖基化和广泛的翻译后修饰
? 重组病毒易于筛选
? 可折叠部分卵白
? 无内毒素
哺乳动物细胞表达系统
哺乳动物细胞表达系统能够为重组人源卵白提供最接近于天然状态的翻译后修饰、卵白质折叠和聚合,具备活性卵白所必须的空间结构和修饰。
我们拥有奇特的哺乳动物细胞表达载体和多种转染要领组合,凭据目的卵白选用定制化计划,优化表达条件,从而大大提升表达量,缩短实验周期。
适用于 疫苗、抗体等
优点
? 较高的表达水平
? 准确的卵白折叠和翻译后修饰
? 可表达排泄卵白
? 悬浮培养特性允许大规模生产
? 无内毒素
目前可用的表达宿主包括但不限于以下
原核 昆虫细胞 酵母 哺乳细胞
OrigamiB(DE3) Tuner(DE3) DH10Bac C41(DE3) High Five X33 Expi293F
Rossetta(DE3) plySs BL21(DE3) T7pLysY BL21(DE3) plySs Sf9
T7 express HT115(DE3) C43(DE3) Rossetta(DE3) Sf21
3. 卵白纯化
了解待纯化样品稚窨的卵白及主要杂质的性质,凭据卵白质的来源、性质(分子巨细、等电点)和稳定性(卵白质对温度、极端PH、卵白酶、氧和金属离子等的耐受性)等信息,设计最适的卵白质纯化思路。
  • cq9电子低温匀浆破碎
    收获细胞后,通过液体剪切作用来大规模破碎细胞,收获细胞物质以用于后续纯化
  • 凝胶过滤层析
    又称为排阻层析或分子筛。凭据被疏散样品中各组分相对分子质量巨细的差别进行洗脱疏散。操作条件比较温和不需要有机溶剂。
  • 亲和层析
    通过生物分子之间的特异性相互作用实现卵白疏散纯化,亲和吸附剂上的配基有选择地吸附能与其结合的物质。具有高选择性、高纯度、快速等特点,通常在重组卵白的疏散中作为cq9电子步的粗提纯,对大部分杂质卵白进行去除。
  • 离子交换层析
    差别卵白具有差别的等电点,当其在差别pH缓冲液条件下时所带的电荷差别,可凭据卵白带电性质选择差别的离子交换柱。历程可逆、操控性强,在精纯办法中常与其他要领结合使用。
  • 疏水作用层析
    凭据生物分子疏水性质实现纯化的一种层析要领,在高离子强度下,增进卵白质与层析介质间疏水作用力,实现吸附;在降低流动相离子强度时,卵白质分子与层析介质疏水作用削弱,目的卵白即可洗脱和收集。
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